摘要： 硒元素廣泛的存在于海洋生物體、水質(zhì)、食品以及飼料中，檢測(cè)其含量也有著許多的方法。其中熒光分光光度法是對(duì)熒光物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的有效方法，它是硒元素含量測(cè)定的一個(gè)比較常用的方法。
本文以測(cè)定海洋生物體中硒元素含量為例，依據(jù)GB 17378.6-2007《海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范：第6部分生物體分析》12.1 硒 熒光分光光度法（仲裁法），應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計(jì)對(duì)硒元素含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果證明此方法操作簡(jiǎn)便， 線性良好是測(cè)定硒元素含量的理想方法。
關(guān)鍵詞： 熒光分光光度法 硒 海洋生物體 水 食品 飼料
?原理
生物樣品經(jīng)硫酸—高氯酸—鉬酸鈉消解，在酸性介質(zhì) 中，四價(jià)硒與2,3-二氨基萘（DAN）反應(yīng)生成有綠色熒光的 4,5-苯并苤硒腦，用環(huán)己烷萃取，在激發(fā)波長(zhǎng)376nm， 發(fā)射波長(zhǎng)520nm下，進(jìn)行熒分光光度測(cè)定。
?實(shí)驗(yàn)條件
儀器及附件：
天津港東 F-380 型熒光分光光度計(jì)
熒光石英比色皿
分析條件：
激發(fā)波長(zhǎng)：376nm
發(fā)射波長(zhǎng)：520nm
藥品：
硝酸（優(yōu)級(jí)純）、高氯酸（優(yōu)級(jí)純）、鹽酸（優(yōu)級(jí)純）、氨水 （優(yōu)級(jí)純）、甲基紅溶液、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）、鹽酸羥胺、2， 3-二氨基萘、硒標(biāo)準(zhǔn)溶液等。
其它：
精密pH試紙、電熱板、分析天平（0.0001g） 、粉碎機(jī)、烘箱、水浴鍋、具塞比色管、分液漏斗、擦鏡紙、容量瓶、三角瓶、移液管等。
?樣品及標(biāo)準(zhǔn)樣品處理
1、樣品前處理
將樣品進(jìn)行烘干， 并用瑪瑙研缽磨碎， 全部過(guò)80目～100目（180μm ～ 154μm）尼龍篩。
2、樣品消化
（1）樣品制備液流程圖
（2）樣品空白制備液
按照上面樣品制備流程圖的步驟制備樣品空白制備液，即不加入待測(cè)樣品，直接進(jìn)入“加水潤(rùn)濕”步驟。
（3）樣品及樣品空白待測(cè)液
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線待測(cè)液
取6個(gè)250mL錐形瓶， 分別加入0.00mL,1.00mL,2.00mL,3.00mL,4.00mL,5.00mL硒標(biāo)準(zhǔn)使用液（0.1μg/mL） ，加水約10mL， 混勻。按照樣品消化流程對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行消化處理，然后進(jìn)行待測(cè)液的制備，配制成硒標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液待測(cè)液。
? 測(cè)定結(jié)果
應(yīng)用港東F-380型熒光分光光度計(jì)的“光度測(cè)定”模塊建立硒標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，并進(jìn)行樣品測(cè)定。
? 結(jié)論
采用熒光分光光度法測(cè)定硒元素含量，操作簡(jiǎn)單，方法準(zhǔn)確，是一種理想的方法。
由于硒元素待測(cè)液遇光不穩(wěn)定， 而且在測(cè)定過(guò)程中需要進(jìn)行樣品的背景扣除， 因此實(shí)驗(yàn)對(duì)儀器的功能要求更高。港東 F-380型熒光分光光度計(jì)率先在硬件上采用了激發(fā)側(cè)擋光快門的設(shè)置， 從而避免了樣品被強(qiáng)光的直接照射； 軟件上采用了獨(dú)特 的雙背景扣除功能，自動(dòng)計(jì)算硒元素的濃度，使整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，結(jié)果重現(xiàn)性良好。
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